奧林巴斯顯微鏡在現(xiàn)代社會中的應用非常廣泛，我們需要提高設備的使用效率，把設備的大功能發(fā)揮出來。操作人員需要掌握奧林巴斯顯微鏡的使用法則，提高顯微鏡的使用效率。而在使用的過程中，樣品需要脫水，所脫掉的水份平均約占組織重量的三分之二，從取材到鏡下觀察，樣品還要經(jīng)過一系列的化學與物理因素的處理。因而建立了冷凍技術。那么奧林巴斯顯微鏡的冷凍技術到底如何，請隨上海維翰一起走進奧林巴斯顯微鏡冷凍技術的世界。

　　奧林巴斯顯微鏡的冷凍技術不僅能解決某些常規(guī)方法不可避免的問題，揭示常規(guī)方法無法看到的一些結構細節(jié)，而且所得結果也可與常規(guī)方法的結果進行比較，顯微鏡檢驗后者的客觀真實性。
　　其中冷凍技術所面臨的一個共同間題是避免產(chǎn)生冰晶，特別是大的冰晶。這些冰晶一且產(chǎn)生，將會使細胞結構嚴重破壞。因此，要設法在冷凍過程中只產(chǎn)生很小的冰晶，奧林巴斯顯微鏡如果可能，好不產(chǎn)生冰晶，即使組織中的水份處在“玻璃態(tài)”。
　　奧林巴斯顯微鏡為達到冷凍這一目的，目前采取的措施有兩個：
　　(1)速凍。尼康顯微鏡單純使用速凍時，為了不產(chǎn)生冰晶，奧林巴斯顯微鏡組織的冷凍速度應達到一1000C/ (s·cm)或更快；
　　(2)使用冷凍保護劑，使用保護劑后，徠卡顯微鏡組織的冷凍速度可降至10- 1000C/(s·cm)，而不致產(chǎn)生大的冰晶。
　　樣品經(jīng)冷凍后，在真空中斷裂，并制備裂面的復型，用于電鏡觀察的方法稱為冷凍斷裂。如果在制備復型前，奧林巴斯顯微鏡先加溫樣品，使裂面上的冰部份升華，則稱為冷凍蝕刻。這兩種方法的共同特點是可以在復型膜上奧林巴斯顯微鏡觀察裂面的立體形象，此外，冷凍蝕刻還可以揭示細胞膜內(nèi)外表面的二維結構。
　　固體升華為氣體的方法，因無界面形成，奧林巴斯顯微鏡樣便不會受表面張力損傷。
　　冷凍干燥的操作原則是取材后立即將樣品放入液氮中，奧林巴斯顯微鏡然后將冷凍的樣品移入真空裝置(如真空噴涂儀)中，在低真空(10-Zt)中抽干。但當樣品直接放入液氮中時，奧林巴斯顯微鏡樣品周圍往往有許多小泡(由于樣品溫度大大高于液氮，液氮在樣品周圍沸騰造成)，阻礙樣品內(nèi)部進一步冷卻。
　　克服的辦法是先把樣品放入液態(tài)丙烯(一800C)、或液態(tài)乙烷(一800c)、甲烷(一480C)中冷凍后，奧林巴斯顯微鏡再轉移至液氮中。80年代日人用有機溶劑干燥法，如用氟里昂TF或酒精冷凍干燥法等，奧林巴斯顯微鏡效果也很好。
　　以酒精冷凍干燥法為例，奧林巴斯顯微鏡簡述操作程序：樣品按普通掃描電鏡標本制備方法進行固定和乙醇系列脫水，然后將其由100%乙醉移至100%乙醚中，再將樣品投入裝滿液氮的高約5cm的金屬杯中使之冷凍。把裝有冷凍樣品的金屬杯放入真空裝置中，用旋轉泵抽氣。
　　奧林巴斯顯微鏡由于在封閉空間體積不變的情況下，壓力降低會引起溫度下降，液氮變?yōu)楣虘B(tài)氮并且升華。然后樣品中的乙醉也升華，樣品干燥。待金屬杯溫度回到室溫后取出樣品，乙睛急速蒸發(fā)時，就要冷卻固化。利用這種性質(zhì)很容易將樣品干燥。乙睛另一性質(zhì)是它可溶于水也可溶于乙醇.因此可以用乙腑干燥標品，其步驟如下：
　　樣品按一般方法固定，用濃度遞增的乙腑系列(50寫-100%)脫水(每次脫水時間需20min )。用容徽約lml的鋁制容器裝滿乙脯，把已脫水的樣品放入。將該容器放入真空裝置中。抽真空，奧林巴斯顯微鏡容器驟冷，乙睛成為固態(tài)。繼續(xù)抽真空時乙睛升華、樣品干燥。